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CAR-T細胞治療技術介紹
點擊次數(shù):2674 更新時間:2019-05-24

CAR-T(全稱Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy)是嵌合抗原受體T細胞免疫療法的英文縮寫。CAR-T多年前就已經(jīng)出現(xiàn),但是在近幾年才被應用到臨床上。2017年8月31日,個基因治療方法CAR-T細胞藥物Kymriah被美國FDA批準上市。這標志著一個全新的醫(yī)療時代的到來。

T細胞是淋巴細胞的主要組分,它通過細胞免疫應答消滅特異性抗原。細胞免疫的作用主要有兩種:與靶細胞特異性結合,破壞細胞膜,直接殺傷靶細胞;釋放淋巴因子,使免疫效應擴大和增強。天然T細胞需要MHC分子呈遞多肽與T細胞受體TCR結合才能識別病原或腫瘤,而它們有多種逃逸機制。CAR-T則是在T細胞中通過基因工程轉入能夠產生嵌合抗原受體(CAR)的序列,使T細胞識別更加具有特異性并且不受HLA限制,從而有效的消滅腫瘤細胞。CAR-T細胞治療流程主要包括:

1.    自體T細胞的分離及激活

首先,從患者體內的外周血中分離白細胞,其他成分返回血液循環(huán)。當白細胞收集足夠后,對T細胞進行富集,富集可以通過密度梯度離心法完成。T細胞亞群的分離通過CD4/CD8特異性抗體或者表面標記偶聯(lián)磁珠進行分離。通過CD3及CD28等抗體刺激,活化分離的細胞。

2.    CAR-T細胞的制備

CAR-T細胞的制備是通過基因工程技術給T細胞加入一個能識別腫瘤細胞、同時激活T細胞、終殺死腫瘤細胞的嵌合受體。相關基因工程技術包括慢病毒、γ逆轉錄病毒、睡美人轉座子系統(tǒng)或mRNA轉染、mRNA電轉等。制備完成后通過細胞培養(yǎng)技術在體外大規(guī)模培養(yǎng)CAR-T細胞,使其數(shù)量達到治療水平。

3. 將體外培養(yǎng)的CAR-T細胞回輸至病人體內

CAR-T在患者體內發(fā)揮功能, CART細胞一旦發(fā)現(xiàn)癌細胞,不僅會殺死它,還會開始增殖,創(chuàng)造出龐大的滅癌大軍。

 

 

據(jù)報道,目前中國國內已經(jīng)有數(shù)十家企業(yè)與醫(yī)療機構參與CAR-T項目研究,2018年3月12日,南京傳奇生物的CAR-T制劑成為國內申報臨床研究的獲批項目。2018年9月7日,中國醫(yī)藥生物技術協(xié)會發(fā)布了《嵌合抗原受體修飾T細胞(CART細胞)制劑制備質量管理規(guī)范》,為方興未艾的CAR-T細胞治療技術提供了可靠的依據(jù),保證CAR-T細胞制劑在臨床研究和應用時的質量,讓這一技術得以的服務于人類。

對于CAR-T細胞治療來說,CAR-T細胞制備是重要的。這一步驟結合了基因工程和細胞培養(yǎng)技術,具有很高的技術難度。

為了制得合適的CAR-T細胞,我們需要通過基因技術將能生產CAR的序列傳導到T細胞中,通常使用多的技術是慢病毒比如人類免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 慢病毒載體,可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。慢病毒可有效地感染多種類型的細胞,如神經(jīng)元細胞、干細胞等。我們可以通過人工合成的CAR元件克隆至慢病毒載體,包裝假病毒。再用這些假病毒感染從患者體內分離的T細胞,生產CAR-T細胞。生產出來的CAR-T細胞數(shù)量通常不能滿足治療的需要,這就需要對CAR-T細胞進行培養(yǎng),使細胞數(shù)量達到使用要求。

在這些相關的實驗中,大家通常會把注意力關注在載體、細胞、培養(yǎng)基的好壞中,但是實驗用水卻往往會被忽視。實際上,水對于整個實驗來說,起到了重要的輔助作用。在細胞培養(yǎng)中,超純水用來配置和稀釋液體培養(yǎng)基、各種緩沖液等試劑,潤洗器具、容器。純水用來清洗器具、容器,給水浴鍋、滅菌器,培養(yǎng)箱用水(水套式)等設備提供進水。如果細胞培養(yǎng)用水含有雜質,會帶來很大的影響:

離子:改變滲透壓

微生物:直接污染,改變微環(huán)境(如 pH),影響增殖,死后釋放內毒素等

內毒素:改變細胞外形、活化細胞、促進或抑制細胞分裂、影響細胞附著等

有機物:水體中溶解性和懸浮性有機物含碳的總量。間接反映出水中細菌和內毒素含量的高低。

對于CAR-T細胞治療來說,不但需要滿足《中國藥典》2015年版的相關要求,還應該滿足細胞培養(yǎng)的特別需要。Merck  Sigma-Aldrich建議細胞培養(yǎng)應使用超純水,無細菌,內毒素 < 0.005 Eu/ml,pH 5.0 - 7.0;Thermo Scicentific要求使用無細菌,內毒素<0.005 Eu/ml的超純水。所以CAR-T細胞治療必須使用高品質的超純水系統(tǒng)。樂楓新一代 Genie G 智能型一體化超純水系統(tǒng)一機兩水,可以同時制備EDI 純水和超純水。Genie G 生產的超純水不但符合《中國藥典》2015年版的數(shù)據(jù)要求,還超過CLSI臨床實驗室試劑純水CLRW的要求。取水終端采用RephiBio過濾器,確保產水無細菌,內毒素 < 0.001 Eu/ml,RNase < 0.5 pg/ml,DNase < 10 pg/ml。Genie G可儲存2年的水質報告,具有可追溯性。樂楓還提供中英文的3Q驗證服務,可幫助用戶實驗室順利通過美國FDA或者歐盟EMA的相關認證。Genie G可以充分滿足生命科學技術整體用水的需求,質量不輸進口設備,用戶使用起來,*可以“用水無憂”。

    

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關于上海樂楓生物科技有限公司

       上海樂楓生物專業(yè)從事水純化和實驗室分離純化產品的研發(fā)、設計和制造,致力于,為生命科學和生物技術提供精銳品質、高附加值的創(chuàng)新產品。樂楓產品線包括實驗室純水系統(tǒng)、密理博純水兼容耗材和實驗室分離純化過濾產品。成立十年,樂楓創(chuàng)立出了自己的品牌RephiLe(瑞楓),擁有30多項知識產權和多個軟件著作權。產品銷往近90個國家和地區(qū)。更多 RephiLe 產品信息,請登陸:樂楓
 

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